书名：糖剥夺对肌源性IL-6表达的影响及其调控机制 细胞模型研究
作者：张雪琳
ISBN：978-7-5644-1345-3
出版社：北京体育大学出版社
出版日期：2013.06
目的：IL-6是一种多效的细胞因子，运动时IL-6主要来源于骨骼肌。本研究以体外培养的C2C12小鼠骨骼肌成肌细胞为模型，观察糖剥夺（Glucose deprivation， GD）对肌源性IL-6基因表达和蛋白水平的影响，探讨糖剥夺状态下诱导肌源性IL-6表达的信号调控机制。方法：（1）培养C2C12细胞，诱导分化为成熟的肌管细胞。（2）以含葡萄糖4.5g/L（对照GC组）和不含葡萄糖（糖剥夺GD组）培养基处理细胞0、6、12、18、24小时，分别采用Real-Time PCR和双抗夹心ELISA方法测定细胞IL-6mRNA和培养基中IL-6蛋白水平。（3）GD状态下，分别加入ROS清除剂（NAC）、p38MAPK抑制剂（SB203580）和NF-KB抑制剂（NF-KB Activation Inhibitor）阻断与IL-6表达有关的信号通路，ELISA检测24小时后IL-6蛋白水平。结果：（1）GD组所有时间点IL-6mRNA表达均高于GC组，其中在18和24小时差异具有显著性（p<0.05）。（2）GC及GD组IL-6蛋白水平均自0-24小时逐渐升高；自6小时起GD组所有时间点IL-6蛋白水平均高于GC组（p<0.05）。（3）GC+NAC组较GC组、GD+NAC组较GD组IL-6蛋白水平均显著降低（均p<0.01）；糖剥夺与NAC之间存在交互作用（p<0.01），NAC（ROS清除剂）可抑制GC和GD状态下IL-6表达。（4）GC+SB203580组较GC组、GD+SB203580组较GD组IL-6蛋白水平显著降低（p<0.01），糖剥夺与SB203580之间存在交互作用（p<0.01），SB203580（p38MAPK抑制剂）可抑制GC和GD状态下IL-6表达。（5）NF-κB抑制剂对IL-6蛋白水平无显著性影响（p>0.05）。结论：（1）体外培养C2C12小鼠骨骼肌成肌细胞诱导分化模型成功建立，可用于糖剥夺对IL-6表达影响及其调控机制研究。（2）正常培养的C2C12细胞存在IL-6基因表达和蛋白释放现象，糖剥夺可增强IL-6基因表达和蛋白释放。（3）糖剥夺诱导的肌源性IL-6表达是多条信号通路共同作用的结果，ROS和p38MAPK信号通路在糖剥夺诱导肌源性IL-6表达的信号调控过程中起到主要作用。（4）NF-KB信号通路在糖剥夺诱导的肌源性IL-6表达的信号调控过程中不起主要作用。